Otávio Valério Carvalho , 1 , 2 Clarisse Vieira Botelho , 2 Caroline Gracielle Torres Ferreira , 2 Paulo Oldemar Scherer , 1 Jamária Adriana Pinheiro Soares-Martins , 3 Márcia Rogéria Almeida , 2 y Abelardo Silva Júnior 2 , *
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CONTINÚA TERCERA Y ÚLTIMA PARTE……
La defensa del huésped depende del sistema inmunológico innato, que también es responsable de producir señales que activan la respuesta inmune adaptativa [ 55 ]. Los interferones de tipo I (IFN I, por ejemplo, IFN α / β ) son elementos críticos en la defensa inmune innata contra los virus [ 56 , 57 ]. Sin embargo, un estudio in vitro con una cepa de CDV altamente virulenta mostró interferencia con la función del IFN al alterar la señalización para la síntesis de proteínas antivirales [ 58 ].
En el curso inicial de la infección por CDV hay un aumento de proteínas virales, ARN mensajeros (ARNm), complejo mayor de histocompatibilidad de clase II (MHC II), receptores de hialuronato CD44 y citocinas proinflamatorias [ 59 , 60 ]. Las lesiones crónicas se caracterizan por la reducción o pérdida de proteínas virales y ARNm, una fuerte expresión de MHC II y una afluencia masiva de monocitos [ 49 ].
La resolución de la infección por CDV requiere respuestas inmunes humorales y celulares críticas. La magnitud de la respuesta inmune humoral está relacionada con la intensidad de la enfermedad. En general, la protección humoral en el moquillo canino se produce mediante la producción de anticuerpos contra las nucleoproteínas virales, seguida del desarrollo de una respuesta inmune humoral específica a las proteínas de la envoltura viral [ 61 , 62 ]. La ausencia de una respuesta humoral eficaz conduce a un estado clínico agudo, que suele ser mortal. Los anticuerpos específicos mensurables contra el virus producidos entre 10 y 14 días después de la infección conducen a la persistencia o eliminación del virus. Este último depende directamente de la especificidad de la inmunoglobulina contra las proteínas de la envoltura viral [ 63 ].
La respuesta inmune celular es crítica en la eliminación de MV; sin embargo, la respuesta inmune humoral es relevante para la posterior eliminación del ARN de MV y la limitación de la remisión de la infección viral [ 64 ]. Por otro lado, la eliminación del CDV tiene éxito más adelante en la fase inflamatoria a través de anticuerpos neutralizantes y citotoxicidad humoral mediada por el complemento, factores críticos para la supresión de partículas virales y para la recuperación clínica en animales infectados [ 65 , 66 ].
La respuesta inmune celular en perros infectados por CDV en recuperación solo se puede identificar durante un corto intervalo de tiempo; sin embargo, una inmunidad celular vigorosa y continua que involucre células T citotóxicas, asesinas y asesinas naturales (NK) puede determinar la eliminación de CDV en animales infectados [ 11 , 67 ]. La inmunidad celular efectora contra el CDV se destaca por la falta de una respuesta inmune humoral mensurable [ 15 ].
Los anticuerpos específicos para la proteína H previenen el desarrollo de lesiones en el SNC de animales infectados [ 62 ]. Sin embargo, la ausencia temporal de anticuerpos contra la proteína M viral y la respuesta atenuada o retardada de los anticuerpos fijadores del complemento contra las proteínas de la envoltura viral dan como resultado la persistencia de la enfermedad neurológica [ 61 , 63 ].
Los anticuerpos neutralizantes y la citotoxicidad humoral mediada por el complemento representan factores críticos para eliminar las partículas virales libres, así como para el pronóstico clínico de los animales infectados [ 11 – 65 ]. Los anticuerpos neutralizantes son los encargados de prevenir la diseminación viral intra y extracelular; sin embargo, la exposición prolongada a anticuerpos da como resultado la internalización de antígenos virales de las membranas celulares. Luego, debido a la reducción de la propagación viral, la modulación humoral de la expresión de antígenos virales puede representar un factor favorable para la infección persistente en perros, probablemente debido tanto a la disminución en el reconocimiento de los antígenos como a la citotoxicidad inadecuada mediada por el complemento [ 68 , 69 ].
La respuesta inmune humoral específica al CDV se puede detectar a lo largo de la vida de los perros, mientras que la respuesta inmune celular sólo se puede detectar durante un corto tiempo en perros convalecientes [ 11 ]. La importancia de la respuesta inmune celular en el moquillo canino se evidencia a través de la inmunidad protectora en ausencia de respuesta humoral mediada por anticuerpos mensurables [ 70 ].
El CDV puede persistir en regiones de la sustancia blanca o periféricamente a ellas, ya que no presentan lesiones inflamatorias desmielinizantes [ 18 ]. La persistencia viral ocurre durante el desarrollo progresivo de la enfermedad crónica; en este caso, la replicación viral ocurre más rápidamente en comparación con la respuesta inmune. La patogénesis de las lesiones en la fase crónica está directamente relacionada con la actividad viral [ 19 , 71 , 72 ].
En perros mayores de seis años, la persistencia viral en el SNC después de una infección aguda puede desencadenar encefalitis en perros viejos, una forma rara y crónica de panencefalitis, que se caracteriza por una inflamación progresiva de la materia gris en ambos hemisferios cerebrales y el tronco del encéfalo. Esta condición involucra animales inmunocompetentes con persistencia viral en el SNC y respuesta inmune marcada por una mayor expresión de MHC. Las lesiones están presentes en la corteza cerebral, el núcleo basal, el tálamo y el hipotálamo y también se caracterizan por infiltración perivascular linfocítica diseminada, proliferación difusa de células microgliales generalizadas, astrogliosis, degeneración neuronal y neuronofagia [ 73 ].
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4. Mecanismos de desarrollo de lesiones neurológicas
4.1. Entrada y propagación de CDV en el SNC
La infección del SNC es la complicación más grave del moquillo canino y provoca una variedad de trastornos neurológicos a menudo con un mal pronóstico. Por lo general, los signos neurológicos ocurren en ausencia de signos sistémicos [ 19 , 74 ].
Aspectos como la presencia de anticuerpos y el depósito de complejos inmunes, que ocurren durante la respuesta inmune sistémica, pueden contribuir a la propagación viral en el endotelio del SNC. Tanto los virus libres como los unidos a plaquetas o linfocitos invaden las células endoteliales vasculares de las meninges, las células del plexo coroideo del cuarto ventrículo y las células ependimarias del sistema ventricular lineal [ 11 ]. Además, las frecuentes lesiones subpiales y periventriculares asociadas con el hecho de que el virus se encuentra fácilmente en las células del plexo coroideo y el epéndimo demuestran que la penetración viral en los tejidos cerebrales se produce a través del LCR [ 18 , 75 ].
Los astrocitos se consideran células diana del CDV en el SNC y están relacionados con lesiones desmielinizantes que son muy características de la encefalitis aguda y crónica [ 71 , 76 ]. En cuanto a la dispersión viral en el SNC, se observó que la propagación del CDV en los astrocitos no requería partículas infecciosas, ya que la proteína H viral era crucial para permitir la transmisión viral de una célula a otra a través de la actividad de fusión intercelular. Además, se descubrió que la propagación viral a células vecinas puede ocurrir en intervalos de tiempo muy cortos, introduciendo la idea de que la transmisión lateral entre células del cerebro es altamente eficiente. Por lo tanto, CDV podría utilizar uniones gap para extenderse a la red sincitial de astrocitos [ 77 ].
Si bien la fase aguda del moquillo canino carece por completo de una respuesta inmune antiviral eficaz, los anticuerpos IgM anti-CDV surgen dentro de las dos primeras semanas de la infección [ 78 ]. A pesar de la ausencia de manguitos perivasculares, muchas células CD8+ se encuentran en las lesiones desmielinizantes agudas y también se distribuyen de forma difusa en el parénquima cerebral, lo que se correlaciona con áreas de infección viral. Se encuentran títulos elevados de IL-8 en el líquido cefalorraquídeo de animales con lesiones agudas en la mielina. Esto sugiere que la activación inicial de la microglía puede provocar la invasión de células T en el SNC [ 79 ].
La acción directa de la actividad viral en el SNC causa encefalitis aguda, que aparece en las primeras etapas de la infección en animales jóvenes o inmunodeprimidos [ 73 , 80 ]. El CDV provoca lesiones multifocales en la sustancia gris y blanca. Las lesiones en la sustancia gris incluyen infección neuronal y necrosis y pueden provocar polioencefalomalacia. Por otro lado, los daños en la sustancia blanca se definen por lesiones mielínicas y se correlacionan con la replicación viral en las células gliales. Si existe una inmadurez fisiológica del sistema inmunológico y/o una inmunosupresión inducida por el virus, los cambios inflamatorios son menores [ 18 , 80 ].
En los hurones, el CDV también puede utilizar vías neuronales para acceder y diseminarse a través del SNC [ 24 ]. Sin embargo, la infección de los astrocitos de la sustancia blanca ocurre exclusivamente en perros y es muy importante para el proceso de desmielinización. Estas células son el principal objetivo del CDV in vivo e in vitro [ 77 ]. También se ha demostrado que los morbilivirus recién descubiertos, el virus del moquillo focino (PDV), el morbilivirus de la marsopa (PMV) y el morbilivirus del delfín (DMV) producen un mecanismo de desmielinización multifocal en animales infectados [ 81 ].
En la mayoría de los casos de moquillo canino espontáneo, el virus causa lesiones multifocales en la sustancia gris y blanca del SNC [ 73 ]. Generalmente prevalecen las lesiones desmielinizantes y no hay lesiones en la sustancia gris. Los sitios preferenciales son el cerebelo y la sustancia blanca periventricular, especialmente alrededor del cuarto ventrículo, las vías ópticas y la médula espinal [ 75 ].
El CDV llega al cerebro a través de células mononucleares infectadas que cruzan la barrera hematoencefálica. Otra posibilidad más importante a considerar es el hecho de que el CDV también puede llegar al SNC a través de la circulación en el líquido cefalorraquídeo y se asocia con el epéndimo que recubre los ventrículos [ 75 ]. Esto explica la frecuente localización periventricular y subpial de las lesiones [ 19 ].
4.2. Neuropatología de los procesos desmielinizantes
El CDV tiene tropismo por los tejidos mielinizados del cerebro y la médula espinal en el SNC. A diferencia de otras infecciones neurológicas, las neuronas no se ven afectadas principalmente en la enfermedad del moquillo canino. Por lo tanto, tanto la distribución como la naturaleza de las lesiones difieren de las observadas en la mayoría de los demás casos de encefalitis [ 82 ].
La desmielinización comienza aproximadamente tres semanas después de la infección y es posible gracias a una inmunosupresión grave y la ausencia de proceso inflamatorio [ 19 ], ya que no se observan manguitos perivasculares [ 83 ]. Las lesiones iniciales se caracterizan por hinchazón de las capas de mielina y astrocitos, vacuolización de la sustancia blanca y fagocitosis de la mielina. Una explicación aparente de la desmielinización sería la infección por oligodendrocitos; sin embargo, bajo microscopía óptica se ha observado que la mayoría de las células infectadas en la sustancia blanca son astrocitos [ 84 ].
La mayoría de los estudios de microscopía electrónica coinciden en que la infección de oligodendrocitos es muy rara en el moquillo canino [ 75 , 85 , 86 ]. A pesar de ello, el ARNm del CDV se puede detectar en aproximadamente el 8% de los oligodendrocitos alrededor de las lesiones. En cultivos de células cerebrales caninas se observó una infección temprana con transcripción viral, pero no traducción, estrictamente en oligodendrocitos, lo que resultó en una infección no citolítica y una propagación lenta de una cepa CDV virulenta [ 87 ].
Existen dos hipótesis sobre los mecanismos implicados en el proceso de desmielinización durante la fase aguda de la infección por CDV. La primera hipótesis describe el daño directo de la mielina o de las células mielinógenas (desmielinización primaria) (Figura 1(a)). Los estudios de ultraestructura mostraron microvacuolación y pérdida de orgánulos en oligodendrocitos infectados. Estas transformaciones morfológicas están precedidas por una disfunción metabólica con una pronunciada disminución de la actividad de la cerebrósido sulfotransferasa (enzima específica de los oligodendrocitos) poco después de la infección [ 88 ]. Además, se ha demostrado una disminución espectacular de la transcripción de mielina en cultivos de células cerebrales infectadas. En general, la infección aguda de la sustancia blanca produce cambios metabólicos que conducen a la desmielinización de los oligodendrocitos [ 19 ].
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Figura 1
Representación esquemática de los posibles mecanismos implicados en el proceso de desmielinización en el curso de la enfermedad aguda del moquillo canino. (a) Desmielinización primaria: acción directa del CDV sobre los oligodendrocitos. (b) Desmielinización secundaria: acción indirecta del CDV sobre los oligodendrocitos y la vaina de mielina. CDV: virus del moquillo canino; PBM: proteína básica de mielina; ROS: especies reactivas de oxígeno (radicales libres).